Estudo de sensor de espalhamento dinâmico de luz baseado na tecnologia de amplificação por substituição de cadeia para detecção de aflatoxina M1

FAN Tao ,  

CUI Hao ,  

XIA Tao ,  

WU Bao-zhu ,  

LI Ting-ting ,  

摘要

Este estudo construiu de forma inovadora um sistema de sensores de espalhamento dinâmico de luz (DLS) simples, de baixo custo e alta sensibilidade, combinado com a tecnologia de amplificação por substituição de cadeia baseada em endonuclease (NESDA) para a detecção de aflatoxina M1 (AFM1). Na presença de AFM1, a sequência contendo o aptâmero AFM1 hibrida-se parcialmente com o DNA do primer, desencadeando a reação NESDA e produzindo grande quantidade de DNA de fita simples (ssDNA). O DNA de fita simples gerado hibrida-se com sondas de DNA ligadas a nanopartículas de ouro, levando à agregação das nanopartículas de ouro e ao aumento do seu diâmetro hidrodinâmico médio. Essa mudança pode ser detectada por DLS para realizar análises quantitativas. Para melhorar o desempenho da detecção, o sistema examinou o efeito de parâmetros-chave, como temperatura da reação NESDA, tempo de incubação, concentração do DNA molde, e as quantidades adicionadas de polimerase e endonuclease sobre o sinal de detecção. Os resultados experimentais mostraram que, sob condições ideais, o diâmetro médio das nanopartículas de ouro apresenta uma boa relação linear com a concentração de AFM1 na faixa de 8,3 a 1000 pmol/L, com limite de detecção tão baixo quanto 1,3 pmol/L. O método foi aplicado com sucesso na detecção de AFM1 em amostras comerciais de leite, com taxas de recuperação adicionadas entre 94,3% e 107%, confirmando a confiabilidade da aplicação prática e amplo potencial para futuras avaliações de segurança alimentar.

关键词

Aflatoxina M1; tecnologia de amplificação por substituição de cadeia; tecnologia de espalhamento dinâmico de luz; endonuclease; nanopartículas de ouro; leite

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