O sequenciamento transcriptômico de célula única (scRNA-seq) oferece uma resolução sem precedentes para retratar a heterogeneidade celular, porém os métodos tradicionais de scRNA-seq apresentam alta taxa de perda celular, contaminação por múltiplas células (Doublets) e custo elevado. Para superar essas limitações, este artigo desenvolveu o método Well-Multi-seq. Ao combinar um chip microperfurado aninhado com exclusão por tamanho e captura de fluido quase estático, juntamente com uma estratégia de marcação com oligonucleotídeos modificados com colesterol, foi alcançada alta eficiência de captura celular, baixa contaminação e baixo custo para o sequenciamento transcriptômico de múltiplas amostras em mistura. Utilizando o chip microperfurado aninhado, este trabalho superou a limitação da distribuição de Poisson, alcançando até 94% de ocupação de microesferas, 74% de ocupação celular e 87% de taxa de captura celular, melhorando significativamente a utilização de células e microcavidades. Explorando a característica da inserção estável da molécula de colesterol na membrana celular, as cadeias de oligonucleotídeos codificadas com amostras foram ancoradas na superfície celular, permitindo o sequenciamento misto de múltiplas amostras em um único tubo. Essa estratégia não apenas reduz significativamente o custo dos reagentes e simplifica o protocolo experimental, mas também possibilita o reconhecimento e a remoção de contaminação por múltiplas células na biblioteca. Na seqüenciação mista de linhas celulares humanas e de camundongos, a precisão da marcação das amostras com este método atingiu 92,60% (humano) e 95,28% (camundongo), comprovando sua excelente especificidade de marcação. Graças às múltiplas vantagens do Well-Multi-seq, este método possui valor potencial de aplicação em tipos raros de células, como células tumorais circulantes, amostras de biópsia por microagulha, bem como na análise de processos dinâmicos, como triagem de fármacos e desenvolvimento embrionário, com potencial para se tornar uma ferramenta poderosa para pesquisa básica e diagnóstico clínico.

Sequenciamento de célula única;Chip microfluídico;Marcação múltipla de amostras;Etiquetas modificadas com colesterol