A proteína quinase A (PKA) desempenha um papel importante em vários processos biológicos, regulando sinais celulares, proliferação, diferenciação e apoptose. Portanto, monitorar e inibir a atividade da PKA tem grande importância no diagnóstico médico e na descoberta de medicamentos. Este artigo constrói uma plataforma de sensor eletroquímico baseada em código de barras de DNA (DNA barcode) e na estratégia de amplificação de sinal por amplificação em círculo rolante (RCA) para análise da atividade da PKA e triagem de seus inibidores. Um material composto de gaiolas de nanopartículas de ouro/disulfeto de molibdênio (AuNCs/MoS₂) é usado como material de modificação do eletrodo, cadeias de substrato peptídico são auto-montadas na superfície do eletrodo modificado (AuNCs/MoS₂/GCE) através de ligação ouro-enxofre, e ocorre fosforilação terminal induzida pela PKA, que se liga altamente especificamente às nanopartículas de ouro marcadas com código de barras de DNA (DNA barcode-AuNPs). Sob a ação da ligase de DNA T4, as cadeias de DNA dos DNA barcode-AuNPs hibridizam-se com o DNA molde circular formando uma sonda travadora, e a adição da DNA polimerase phi29 e dNTP induz a reação RCA. O produto RCA forma um enzima simulado com atividade catalítica de G-quadruplex-hemina em conjunto com hemina (Hemin), permitindo amplificação do sinal eletroquímico e análise da atividade da PKA. A faixa de resposta linear desta plataforma para análise da atividade da PKA é de 0,005~100 U/mL, com limite de detecção (LOD) de 1 mU/mL. Este método pode ser usado para triagem de inibidores da PKA e análise da atividade da PKA em lisados de células de câncer de mama humano (MCF-7) e de câncer de fígado (HepG-2), proporcionando um novo método para análise da atividade de quinases.

código de barras de DNA;amplificação RCA;proteína quinase;fosforilação;sensor eletroquímico