Determinação do conteúdo de 37 aminoácidos no soro baseada em cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em tandem

ZHAO Yun-xia ,  

LI Zi-ying ,  

CHEN Xin ,  

ZHANG Yu-xin ,  

XIAO Wei-min ,  

LIU Ai-ping ,  

LI Mei-fang ,  

JIN Yi-bao ,  

DU Qing-ping ,  

WANG Qi ,  

SU Jia-ting ,  

YANG Guo-wu ,  

FANG Wen ,  

摘要

Foi estabelecido um método quantitativo baseado em cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em tandem (LC-MS/MS) para análise de 37 aminoácidos no soro. As amostras foram tratadas com precipitação de proteínas utilizando solução aquosa a 10% de ácido sulfossalicílico, separadas em coluna cromatográfica Phenomenex Kinetex F5 (250 mm × 4,6 mm, 5 μm), com eluente gradiente de solução aquosa a 0,02% de ácido fórmico e acetonitrila. A detecção foi realizada no modo de íon positivo da fonte de ionização por electrospray (ESI) e no modo de monitoramento de múltiplas reações (MRM). O método foi validado metodologicamente; os resultados mostraram boa linearidade para os 37 aminoácidos na faixa do limite de detecção até 1000 ng/mL, com coeficientes de correlação superiores a 0,999, tempos de retenção entre 4,60 e 9,16 min, limites de detecção de 0,2 a 10,0 ng/mL e limites de quantificação de 0,5 a 20,0 ng/mL. A recuperação média para diferentes concentrações adicionadas variou entre 83,2% e 118%, com desvio padrão relativo de 0,90% a 9,4%. O método foi aplicado à análise de 49 amostras de soro; carnosina e cisteína não foram detectadas, a taxa de detecção de homocisteína foi de 10,20%, enquanto as demais 34 aminoácidos apresentaram taxa superior a 90%. O método apresenta alta precisão, sensibilidade e especificidade, podendo ser usado para determinação do conteúdo de aminoácidos em amostras de soro, fornecendo dados mais completos para doenças relacionadas a distúrbios do metabolismo dos aminoácidos.

关键词

cromatografia líquida-espectrometria de massas em tandem;aminoácidos;soro;ácido sulfossalicílico

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