Foi desenvolvido um método de amplificação cooperativa baseado na reação isotérmica de deslocamento de cadeia de ácido nucleico (ISDA) e no sistema CRISPR-Cas12a para detectar microRNA-31 (miRNA-31), usando uma tira de teste de realce fluorescente reverso (rLFTS) como plataforma de sinal para alcançar a detecção visual. Otimizando o design dos primers da reação ISDA e o tampão da reação, conseguiu-se o reconhecimento específico do miRNA-31 e a primeira amplificação do sinal, produzindo um produto de DNA de fita dupla que ativa a atividade de clivagem trans do CRISPR-Cas12a sobre moléculas repórteres de DNA de fita simples (ssDNA) livres, enquanto impede que as sondas de nanopartículas de ouro formem uma estrutura sanduíche com a sonda fluorescente Cy5 na linha de detecção, restaurando assim a fluorescência Cy5. Isso serve como um sinal quantitativo para permitir uma detecção altamente sensível e específica do miRNA-31. O limite de detecção no soro salivar é tão baixo quanto 57,9 amol/L, com taxa de recuperação entre 91,6% e 111%, e os resultados da detecção mostram boa concordância com os resultados quantitativos da reação em cadeia da transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR), com tempo de detecção de apenas 90 minutos. Os resultados experimentais indicam que o método é simples de operar, altamente sensível e rápido, atendendo às necessidades de detecção ultrasensível do miRNA-31 em amostras de saliva.

Reação isotérmica de deslocamento de cadeia;CRISPR-Cas12a;Tira de teste de realce fluorescente reverso;MiRNA-31;Detecção de ácidos nucleicos