Na amplificação isotérmica tradicional por índice, a energia nas extremidades do ácido nucleico alvo e do molde de amplificação simétrico é a mesma; contudo, quando o ácido nucleico alvo hibrida-se com a extremidade 5’ do molde, a amplificação é difícil de iniciar, limitando a análise de quantidades mínimas do ácido nucleico alvo. Este artigo desenvolveu uma estratégia de amplificação isotérmica por índice induzida por hibridação assimétrica (AEXPRA) para análise rápida e de alta sensibilidade de microRNA. Com miR-196b como alvo e baseado em um molde de amplificação assimétrico projetado, devido à complementariedade completa do alvo com a extremidade 3’ do molde, mas complementariedade parcial com a extremidade 5’, o miR-196b pode hibridar-se completamente na extremidade 3’ do molde. O método possui alta sensibilidade, alta especificidade e rapidez. O tempo total de reação é inferior a 30 minutos, podendo detectar miR-196b em concentrações tão baixas quanto 0,42 amol/L. Para validar a praticidade do método, foi aplicado na análise de miR-196b em extratos de soro, distinguindo eficazmente a expressão de miR-196b entre pacientes com câncer de pulmão de células não pequenas e indivíduos normais, com resultados consistentes com RT-qPCR. O método apresenta alta precisão e confiabilidade, e espera-se que desempenhe um papel importante no diagnóstico clínico e na pesquisa patológica de miRNA.

amplificação isotérmica por índice;microRNA;detecção por fluorescência;diagnóstico de doenças