Edwardsiella tarda lento (Edwardsiella tarda) é uma bactéria patogênica importante na aquicultura. Métodos rápidos, eficientes e adequados para detecção no local podem prevenir e controlar efetivamente o surgimento de doenças. Este artigo combina a amplificação por círculo rolante (RCA) com a técnica de tiras cromatográficas (LFS), utilizando microesferas de látex como marcadores, estabelecendo um novo método RCA-LFS para detecção de Edwardsiella tarda. Com base no gene gyrb desta bactéria, foram projetadas sondas bloqueadas e primers de amplificação correspondentes. As condições otimizadas para RCA são: concentração da sonda bloqueada de 500 pmol/L, temperatura de amplificação de 61 ℃ e tempo de amplificação de 50 minutos. Após a amplificação, a tira cromatográfica é inserida diretamente na solução do produto de amplificação, e os resultados são lidos a olho nu. O método apresenta alta especificidade, sem reações cruzadas com outros patógenos comuns, com limite de detecção do DNA genômico de Edwardsiella tarda de 50 ng/mL. Em comparação com marcadores comuns de ouro coloidal, as microesferas de látex são estáveis e coloridas, e espera-se que permitam a detecção simultânea de múltiplas bactérias apenas por mudança de cor. O método RCA-LFS foi utilizado para detectar amostras infectadas de enguia japonesa, com resultados consistentes com a eletroforese em gel convencional, mas o método é mais simples, rápido e fácil para a interpretação dos resultados. O RCA-LFS tem um papel significativo na detecção in loco de patógenos.

amplificação por círculo rolante;Edwardsiella tarda lento;sonda bloqueada;microesferas de látex;tiras cromatográficas