Hidrólise alcalina-enzimática combinada com extração em fase sólida dispersiva para melhorar a precisão da determinação do total de atividade das isoflavonas da soja

GU Wen ,  

LI Chen-man ,  

SUN Zhen ,  

PANG Yue-hong ,  

FENG Yong-wei ,  

SHEN Xiao-fang ,  

摘要

Por meio da extração ultrassônica com solução alcalina de metanol, combinada com hidrólise por β-glucosidase derivada de amêndoas e extração em fase sólida dispersiva com poliamida, foi estabelecido um método para determinar o total de atividade das isoflavonas da soja usando cromatografia líquida ultraeficiente. Os glicosídeos de malonil e acetil das isoflavonas na amostra são hidrolisados em glicósidos básicos sob condições alcalinas e, sob a ação da β-glucosidase, removem os grupos de açúcar, convertendo-se nos respectivos agliconas. As 12 diferentes formas de isoflavonas na amostra transformam-se em apenas 3 agliconas das isoflavonas (daidzeína, genisteína, gliciteína), seguidas por extração em fase sólida dispersiva com pó de poliamida e separação em coluna cromatográfica reversa C18 (2,1 mm i.d. × 50 mm, 1,8 µm). Os resultados mostram que daidzeína, genisteína e gliciteína atingem separação de linha base em 3 minutos; os coeficientes de correlação das curvas padrão (r2) dos 3 agliconas são maiores que 0,999; a recuperação total de isoflavonas varia de 94,3% a 102%; o desvio padrão relativo (RSD, n=6) é menor que 5,0%, indicando alta precisão e exatidão. O método calcula o total de isoflavonas detectando todos os agliconas na amostra, ajudando a reduzir os desafios de resolução, precisão e custo de detecção. Considerando os mecanismos de transformação e absorção fisiológica das isoflavonas no corpo, a quantificação com base no total de agliconas reflete mais cientificamente o nível real de atividade das isoflavonas, evitando a superestimação causada pela soma simples de glicósidos e agliconas.

关键词

Isoflavonas da soja;Poliamida (PA);Extração em fase sólida dispersiva (d-SPE);β-glucosidase;Cromatografia líquida ultraeficiente (UPLC)

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