A geração de segundo harmônico (SHG) é aplicada em diversas disciplinas devido às suas vantagens, como ausência de marcação, baixa fototoxicidade e sensibilidade à estrutura do material. Este estudo utilizou pele de camundongo in vivo como modelo para explorar as condições de imageamento SHG em microscópio de dois fótons. A glicerina foi usada como agente de clareamento, e foram feitas estatísticas da intensidade do sinal SHG e da profundidade de imageamento da pele tratada com glicerina e água. Houve diferença significativa na intensidade do sinal e na profundidade de imageamento entre o grupo tratado com glicerina e o grupo tratado com água (*p ≤ 0,05), comprovando que a glicerina é um agente de clareamento eficaz para experimentos de pele in vivo. Considerando potência do laser, propriedades de fluorescência espontânea do tecido biológico e profundidade de imageamento, a melhor comprimento de onda de excitação para imageamento SHG com o microscópio de dois fótons foi determinada em 900 nm. O uso da glicerina para clareamento e do comprimento de onda ótimo permitiu a coleta do sinal SHG da pele tumoral, realizando a observação in vivo do efeito do tumor sobre a estrutura das fibras de colágeno na pele. Os resultados indicam que o microscópio de dois fótons pode efetivamente realizar imageamento SHG, possibilitando a observação in vivo e o estudo visual da estrutura das fibras de colágeno em organismos vivos.

Microscópio de dois fótons;Geração de segundo harmônico;Tumor;Colágeno