미량 시료 내 N-당체 분석 기술의 개발 및 응용

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摘要

당단백질체 분석에서 초기 시료량 요구가 높은 기술적 도전을 해결하기 위해 본 연구에서는 미량 시료 N-당사슬 준비 기술(GPAT)을 개발하였다. 피펫 팁(Tip)에 각각 C18 및 HILIC 충진제를 장입하여 일체형 현장 단백질 소화, N-당사슬 방출 및 농축을 실현하였다. 현재 일반적으로 사용되는 여과 보조 시료 준비(FASP) 기술 기반 N-당체 분석 전략과 비교할 때, GPAT 기술은 미량 면역글로불린 G(IgG)와 인간 간암 HepG2 세포 추출 단백질의 현장 N-당사슬 방출 및 농축을 가능하게 하여 초기 시료량을 90% 감소시켰으며, 각각 10 μg IgG와 10 μg HepG2 세포 단백질에서 20개 및 39개의 N-당사슬을 감지할 수 있었다. 6명의 건강인(남성 3명, 여성 3명) 소변에서 추출한 10 μg 소변 단백질에서 49개의 N-당사슬이 검출되었다. 본 방법은 미량 복합 단백질 시료의 N-당사슬 간편하고 빠른 정량 분석 전략을 구현하여 향후 당단백질체 방법의 확산 적용 기초를 마련하였다.

关键词

N-당사슬;당단백질체;요단백;기질 보조 레이저 탈착 이온화 비행시간-탠덤 질량분석기

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