핵산 등온 가닥 치환 증폭 반응(ISDA) 및 CRISPR-Cas12a 시스템을 기반으로 마이크로RNA-31(miRNA-31)을 검출하기 위한 상보적 증폭 방법을 구축하였으며, 역형광 증강 시험지(rLFTS)를 신호 표시 플랫폼으로 사용하여 시각적 검출을 실현하였다. ISDA 반응 프라이머 서열 설계 및 반응 완충액을 최적화함으로써 miRNA-31의 특이적 인식과 1차 신호 증폭을 달성하였으며, 이중 가닥 DNA 생성물이 출력되어 CRISPR-Cas12a가 자유 단일 가닥 DNA(ssDNA) 보고 분자를 절단하는 전이 절단 활성도를 활성화시켰다. 동시에 금 나노 프로브가 ssDNA와 검출선의 Cy5 형광 프로브와 결합하여 샌드위치 구조를 형성하는 것을 방해하여 Cy5 형광을 회복시키며, 이를 정량 신호로 사용하여 miRNA-31의 고감도 및 고특이성 검출을 실현하였다. 이 방법은 타액 샘플 내 miRNA-31 검출 한계가 57.9 amol/L에 달하며, 회수율은 91.6%~111%이고, 검출 결과는 정량 역전사 중합효소 연쇄반응(qRT-PCR) 정량 결과와 우수한 일치성을 보였으며, 검출 시간은 90분에 불과하다. 실험 결과 이 방법은 조작이 간단하고 감도가 높으며 검출 시간이 짧다는 장점이 있으며, 타액 샘플 내 miRNA-31의 초고감도 검출 요구를 충족시킬 수 있다.

등온 가닥 치환 증폭;CRISPR-Cas12a;역형광 증강 시험지;MiRNA-31;핵산 검출