롤링서클 증폭과 라텍스 마이크로스피어 표지 크로마토그래피 테스트 스트립을 이용한 지연성 Edwardsiella tarda 검출

WU Jing-ying ,  

FENG Jian-jun ,  

WANG Yi-lei ,  

GUO Song-lin ,  

LIN Peng ,  

摘要

Edwardsiella tarda(지연성 Edwardsiella tarda)는 수산양식에서 중요한 병원성 세균이며, 빠르고 효율적이며 현장 검사가 가능한 방법은 질병 발생을 효과적으로 예방하고 통제할 수 있다. 본 논문은 롤링서클 증폭(RCA)과 크로마토그래피 테스트 스트립(LFS) 기술을 결합하고 라텍스 마이크로스피어를 표지물로 사용하여 RCA-LFS를 이용한 지연성 Edwardsiella tarda 검출 방법을 개발하였다. 해당 균의 gyrb 유전자에 기초하여 락드 프로브와 증폭 프라이머를 설계하였으며, 최적화된 RCA 조건은 다음과 같다: 락드 프로브 농도 500 pmol/L, 증폭 온도 61 ℃, 증폭 시간 50분. 증폭 후 테스트 스트립을 증폭 산물 용액에 직접 넣어 육안으로 결과를 판독한다. 이 방법은 높은 특이성을 가지며, 다른 일반 병원균과 교차 반응이 없고, 지연성 Edwardsiella tarda 게놈 DNA 검출 한계는 50 ng/mL이다. 라텍스 마이크로스피어는 일반적으로 사용되는 콜로이드 금 표지물보다 안정적이며 다양한 색상을 지니고 있어 색 변화만으로 다중 균주의 동시 검출이 가능할 것으로 기대된다. RCA-LFS 방법을 이용해 감염된 일본 장어 샘플을 검출한 결과 기존의 겔 전기영동 결과와 일치하였으나, 이 방법은 더 간단하고 빠르며 결과 판독이 용이하다. RCA-LFS는 병원균 현장 검출에 크게 기여한다.

关键词

롤링서클 증폭;지연성 Edwardsiella tarda;락드 프로브;라텍스 마이크로스피어;크로마토그래피 테스트 스트립

阅读全文