건조혈흔(DBS) 내 20종 약물에 대한 고성능 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법(HPLC-MS/MS) 검출법이 확립되었다. 상대 피크 면적을 평가 지표로 사용하여 단일 인자 실험법으로 건조혈흔 시료의 건조 시간, 건조 온도 및 추출 용매 범위를 결정하였으며, 반응면법을 통해 건조혈흔의 준비 및 추출 조건을 최적화하였다. 최종 최적 조건은 건조혈흔을 50 ℃에서 20분간 건조시키고, 메탄올-아세토니트릴(13:20, 부피비)로 추출하는 것이다. Phenomenex Kinetex F5(100 mm×2.1 mm, 2.6 μm) 컬럼을 사용하여 분리하였고, 0.1% 포름산 수용액-아세토니트릴을 이동상으로 그라디언트 용출하며 고성능 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석을 수행하였다. 결과는 건조혈흔 내 20종 대상 물질이 0.5~100 ng/mL 범위에서 우수한 직선성을 보였으며 상관계수는 0.99 이상, 검출 한계는 0.1~1 ng/mL, 정량 한계는 0.5~5 ng/mL이었다. 저농도, 중농도, 고농도 3개 농도 수준에서의 추출 회수율은 81.1%~124%, 매트릭스 효과는 84.6%~116%, 상대 표준 편차는 모두 15% 미만이었다. 일내 정밀도는 0.18%~9.8%, 일간 정밀도는 0.26%~9.9%였다. 이 방법은 간단하고 빠르며 감도가 높고, 대상 물질이 건조혈흔 내에서 안정적이며 저장과 운송에 용이하여 마약 단속 실무에서 건조혈흔 내 다수 약물의 신속 선별 요구를 충족할 수 있다.