高性能液体クロマトグラフィー-質量分析法による牛Ⅰ型コラーゲン含量測定

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摘要

効率的な液体クロマトグラフィー-質量分析技術に基づき、特徴的なペプチドを用いて牛Ⅰ型コラーゲン含量を検出する方法を確立した。コラーゲンスポンジ試料は酵素分解処理された後、クロマトグラフィーにより分離され、エレクトロスプレーイオン源の正イオンスキャンおよび保持時間依存の単一イオンモニタリングモード(SIM)で測定され、外部標準法で定量した。トリプシン特異的酵素分解によって得られた牛Ⅰ型コラーゲンの特徴的ペプチドはGFSGLDGAKである。このペプチドは0.645~21.5 μg/mLの質量濃度範囲で良好な直線性(r2=0.9994)を示した。方法の定量下限は6.45×10-4 μg/mLである。3.10、2.48、1.55 μg/mLの3つのスパイクレベルで平均回収率は98.2%~102%、ピーク面積の相対標準偏差(n=6)は0.80%であった。コラーゲンスポンジ試料は均一性、安定性および定量性の試験を受け、方法の有効性が確認され、製品の品質が検証された。また、測定された牛Ⅰ型コラーゲン含量は(0.926±0.014)mg/mgであった。この方法は簡便かつ迅速で、再現性に優れ、安定性が高く、牛Ⅰ型コラーゲンを効率的に定量できる。

关键词

高性能液体クロマトグラフィー-質量分析(HPLC-MS); 特徴的ペプチド; 牛Ⅰ型コラーゲン; 定量

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