微量サンプルにおけるN-グリコーム解析技術の開発と応用

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摘要

糖鎖解析における初期サンプル量の多さという技術的課題に対応するため、本研究では微量サンプル用N-糖鎖調製技術(GPAT)を開発した。ピペットチップ(Tip)にC18とHILIC充填剤を別々に充填し、一体型の現場蛋白質消化、N-糖鎖の放出および濃縮を実現した。現在一般的に使用されているろ過支援サンプル調整(FASP)技術に基づくN-グリコーム解析戦略と比較して、GPAT技術は微量の免疫グロブリンG(IgG)およびヒト肝がんHepG2細胞由来蛋白質の現場N-糖鎖放出および濃縮を可能にし、サンプルの初期量を90%削減でき、10μgのIgGおよび10μgのHepG2細胞蛋白質からそれぞれ20本および39本のN-糖鎖を検出できた。6名の健康人(男性3名、女性3名)の尿から抽出した10μgの尿蛋白から49本のN-糖鎖を検出した。本手法は微量複雑蛋白サンプルのN-糖鎖の簡便かつ迅速な定量解析戦略を実現し、さらなる糖鎖解析法の普及応用の基盤を築いた。

关键词

N-糖鎖;グリコーム;尿蛋白;マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型タンデム質量分析計

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