末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼに基づくナノ界面でのDNA成長戦略およびエンロフロキサシン用アプタマーセンサー構築の研究

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摘要

ナノ金(Auナノ粒子、AuNPs)表面にチオール基DNAを組み立ててAuNPs-DNAバイオプローブを作製した後、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ(TdTase)がプローブDNAの3′-OH末端を触媒してDNAの伸長を実現し、長い一本鎖DNA(ssDNA)が得られる。アガロースゲル電気泳動および原子間力顕微鏡(AFM)によってプローブおよびssDNAを評価した結果、TdTaseはナノ界面上でのDNAの高効率な成長を達成でき、巻き状態で鎖長は最大850 nmに達することが示された。このDNA成長戦略をアプタマー技術と組み合わせた。まずナノ金表面にアプタマー断片1を組み立て、アルデヒド化された磁気ビーズ表面にアプタマー断片2を組み立て、これによりエンロフロキサシンに対するアプタマー型バイオセンサー(アプタセンサー)を構築した。このセンサーはENRに対して10~1.0×10^5 ng/mLの範囲で良好な応答性能を示し、検出限界は1.0 ng/mLであり、シプロフロキサシン、オフロキサシン、ノルフロキサシンなどの対照群の信号を明確に識別した。研究により、TdTaseベースのアプタマーセンサーは操作が簡便で、良好な標的分子応答性と特異性を有し、食品安全検査などの分野に新たな研究の道を提供できることが示された。

关键词

ナノバイオプローブ;末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ(TdTase);DNA成長;アプタマーセンサー;エンロフロキサシン

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