固相支持液液抽出法と超高性能液体クロマトグラフィー―タンデム質量分析法を組み合わせた尿中7種多環芳香族炭化水素代謝物の同時測定

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摘要

固相支持液液抽出法(SLE)と超高性能液体クロマトグラフィー―タンデム質量分析法(UPLC-MS/MS)を組み合わせて、尿中の1-ヒドロキシナフタレン、2-ヒドロキシナフタレン、2-ヒドロキシフルオレン、9-ヒドロキシフルオレン、2-ヒドロキシフェナントレン、9-ヒドロキシフェナントレンおよび1-ヒドロキシピレンの7種類のヒドロキシ多環芳香族炭化水素(OH-PAHs)を測定する方法を確立した。実験では0.8 mLの尿酵素分解液をSLEで抽出し、洗脱溶媒の種類および体積の影響を検討し、窒素吹き飛ばし濃縮時の圧力を最適化した。尿試料は6 mLの酢酸エチルで洗脱し、洗脱液を48 kPa(25 ℃)の圧力で窒素吹きして乾燥後、UPLC-MS/MSにより7種類のOH-PAHsを分析し、同位体内標準法で定量した。方法は0.3~3000 mg·L-1の範囲で良好な直線性を示し(r≥0.9951)、検出限界および定量限界はそれぞれ0.05~1.0 mg·L-1および0.15~3.0 mg·L-1であった。3つのスパイク濃度レベルにおける回収率は70.8%~117%であり、日内(n=3)および日間(n=3)の相対標準偏差はそれぞれ3.7%~9.6%および3.7%~11%であった。本法を用いて10名の石油作業者と10名の対照群(大学生)の尿中OH-PAHsレベルを分析した結果、2-ヒドロキシフェナントレンおよび9-ヒドロキシフェナントレンを除く5種のOH-PAHsが石油作業者の尿中で対照群より有意に高く(p<0.05)、統計学的に有意であった。この方法は試料の前処理を注入と洗脱の2段階で完了し、簡単かつ効率的であり、尿試料中のOH-PAHs分析に適用できる。

关键词

ヒドロキシ多環芳香族炭化水素(OH-PAHs);固相支持液液抽出法(SLE);超高性能液体クロマトグラフィー-質量分析法(UPLC-MS/MS);尿

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