DNA四面体ナノ構造プローブに基づく電気化学生物センサーによるDNAメチル化検出

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摘要

本論文では、DNA四面体ナノ構造プローブ(TSP)をキャプチャープローブとして用い、ホースラディッシュペルオキシダーゼ標識IgG抗体(AuNPs-IgG-HRP)をナノ金粒子表面に結合させて信号分子とし、新規なDNAメチル化電気化学センサーを構築した。ワンステップ熱変性法によりTSPを組み立てた後、Au—S結合を介して修飾ナノ金粒子の金電極表面に固定した。標的DNAのハイブリダイゼーション、5-メチルシトシン(5-mc)抗体およびAuNPs-IgG-HRPとの結合後、差動パルスボルタンメトリー(DPV)により検出を行った。サイクリックボルタンメトリー(CV)と電気化学インピーダンス分光法(EIS)を用いて修飾電極の構築過程を電気化学的に評価した。ハイブリダイゼーション時間、5-mc抗体濃度、IgG-HRP添加量、ヒドロキノン(HQ)および過酸化水素(H2O2)濃度がセンサーに及ぼす影響を検討した。最適条件下で、本センサーはメチル化DNAに対し1.0×10-15〜1.0×10-10 mol/Lの線形応答範囲を示し、検出限界(S/N=3)は4.4×10-16 mol/Lであった。本センサーは良好な選択性と安定性を有し、DNAメチル化検出の新たな方法を提供する。

关键词

DNA四面体ナノ構造プローブ;電気化学センサー;DNAメチル化;ナノ金;抗体

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