超高速液体クロマトグラフィー-タンデムトリプル四重極質量分析法によるホエイプロテインパウダー中α-ラクトアルブミンおよびβ-ラクトグロブリンの測定

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摘要

超高速液体クロマトグラフィー-タンデムトリプル四重極質量分析法(UPLC-MS/MS)を用いて、ホエイプロテインパウダー中のα-ラクトアルブミン(α-La)およびβ-ラクトグロブリン(β-Lg)を測定する分析法を確立した。試料はヨードアセトアミドでアルキル化し、その後アルカリ性トリプシンで酵素分解した。Waters ACQUITY UPLC-BEH C18カラム(300 )で分離し、移動相は0.1%の蟻酸水溶液および0.1%の蟻酸アセトニトリルで、グラジエント溶出を用いた。正イオン多重反応モニタリング(MRM)モードで検出し、内部標準法で定量した。結果は、α-ラクトアルブミンおよびβ-ラクトグロブリンがそれぞれ40~1,000 nmol/Lおよび80~2,000 nmol/Lの範囲で良好な直線性を示し、定量下限(S/N=10)はともに0.020 g/100 gであった。添加回収率は84.7%~95.6%、相対標準偏差(RSD、n=6)は1.6%~5.8%であった。上述の方法に基づき、5カ国の4種類のホエイプロテインパウダー(脱塩ホエイパウダーD70およびD90、濃縮ホエイプロテインパウダー、α-ラクトアルブミンパウダー)の含有量測定および差異比較を行った。本方法は操作が簡便で定量精度が高く、ホエイプロテインパウダーなどのタンパク質原料中のα-ラクトアルブミンおよびβ-ラクトグロブリンの測定に利用できる。

关键词

超高速液体クロマトグラフィー-タンデムトリプル四重極質量分析;α-ラクトアルブミン;β-ラクトグロブリン;ホエイプロテインパウダー

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