DNA-リピッドプローブによる細胞膜外pHのインシチュイメージング

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摘要

両端にCy3およびCy5が標識されたi-motif構造を有するDNA鎖にジアシルリポソームを自動的にカップリングし、ジアシルリポソーム-DNAコンジュゲート(DNA-リピッド)プローブを形成する。ジアシルリポソームと細胞膜間の強い疎水性相互作用により、本プローブは細胞膜表面に直接挿入され、低酸素および常酸素条件下での細胞外pHの比率型検出を実現する。高pH条件下では、i-motif構造をもつDNA鎖の両端の蛍光基は分離状態にあり、FRET効果はない。低pH条件下では、i-motif構造をもつDNA鎖が細胞膜表面で四量体構造を形成し、両端の蛍光基が互いに接近して強いFRET効果を発生させる。2種類の蛍光基の蛍光強度比の測定によりpHの定量検出が可能となった。このプローブのpHに対する高感度応答により、低酸素環境における細胞外pHの精密測定が実現し、生理病理学的に重要な意義を持つ。

关键词

低酸素環境;細胞外pH;i-motif構造;ジアシルリポソーム;蛍光共鳴エネルギー移動;イメージング解析

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