グルタルアルデヒド-過マンガン酸カリウム二重固定と凍結乾燥を組み合わせた微生物SEMサンプル調製法の研究

ZHU Xiao-nan ,  

JIANG Yun ,  

WANG Ling-ling ,  

SONG Xiao-tong ,  

WANG Xiao-li ,  

摘要

通常の実験室では、微生物の走査型電子顕微鏡(SEM)サンプルの調製過程において、固定試薬および臨界点乾燥装置の不足という問題に直面することがしばしばあります。これらの問題を解決するために、過マンガン酸カリウム(KMnO4)を細胞固定剤として選択し、SEM調製における固定および乾燥の重要なステップに着目して調製方法の改良と分析を行い、安全で経済的かつ機器依存性の低い汎用的な微生物SEMサンプル調製法の確立を目的としました。大腸菌、枯草菌、酵母を対象に、細胞をそれぞれグルタルアルデヒド単独固定(GA固定)、グルタルアルデヒド-オスミウム四酸化物(OsO4)二重固定(GA-OT固定)、グルタルアルデヒド-過マンガン酸カリウム(GA-PP固定)二重固定で処理し、凍結乾燥、自然乾燥、低温乾燥、中低温乾燥、臨界点乾燥の組み合わせによる処理を行い、乾燥後にSEM観察を実施し、これらの処理が菌体形態および細胞の完全性に与える影響を比較しました。結果として、GA-OT固定およびGA-PP固定はGA単独固定よりも菌体形態の固定効果が著しく優れており、凍結乾燥および臨界点乾燥は菌体の還元形態を良好に保持しました。GA-PP固定-凍結乾燥法はグラム陰性菌、グラム陽性菌および単細胞真核菌の3種の微生物の形態構造を有効に保存し、SEM観察の要件を満たし、経済的で簡便、汎用性が高く安全性に優れ、普及価値が高く、通常の実験室に対して実用的な微生物SEMサンプル調製の代替法となりました。

关键词

微生物;SEMサンプル調製;グルタルアルデヒド-KMnO4二重固定;乾燥

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