超高性能液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法によるシクロホスファミド誘発免疫抑制ラット血清中の5種内因性代謝物の測定

XU Ai-li ,  

WU Min-shan ,  

CHEN Wei-tao ,  

ZENG Zhi-hao ,  

XIAO Guan-lin ,  

LU Wen-sen ,  

LI Yang-xue ,  

摘要

超高性能液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法(UPLC-MS/MS)を用いて、シクロホスファミド誘発免疫抑制ラット血清中の5種類の内因性代謝物、グルタチオン(GSH)、DL-グルタミン酸(DL-Gln)、グルタミン酸(GA)、1-O-ヘキサデシル-SN-グリセロ-3-ホスホコリン(LPC(0-16∶0))、アラキドン酸(AA)の測定法を確立した。血清試料はタンパク質沈殿後、ACQUITY Poroshell 120 SB-C18カラム(2.1 mm×100 mm、2.7 µm)を用いて、メタノール–5 mmol·L-1酢酸アンモニウム水溶液を移動相に梯度溶出法によりGSH、DL-Gln、GA、AAを測定した。LPC(0-16∶0)はACQUITY UPLC BEH Amideカラム(2.1 mm×150 mm、1.7 µm)を用い、アセトニトリル–5 mmol·L-1ギ酸アンモニウム水溶液を移動相に梯度溶出法で測定した。質量分析はエレクトロスプレーイオン化源(ESI)を用い、正・負イオンモードで、内部標準法により定量した。結果は5種の代謝物がそれぞれ該当する濃度範囲で良好な直線性(r>0.995)を示し、検出限界は0.043〜0.178 ng·mL-1、定量下限は0.145〜0.592 ng·mL-1であった。この方法は簡便で迅速、感度が高く、ラット血清中の内因性代謝物の測定に適しており、免疫抑制治療薬の作用機序研究に実験的基盤を提供する。

关键词

超高性能液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析; 血清; 内因性代謝物; 免疫機能抑制

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