動物が窒素マスタード（HN）に曝露された後に形成されるHN-DNA付加体を検出することで、HN曝露のトレーサビリティ確証分析を実現した。6週齢、約200gのSprague-Dawley（SD）ラットに腹腔内注射でそれぞれ窒素マスタード1（HN1）、窒素マスタード2（HN2）、窒素マスタード3（HN3）溶液を投与し、毒剤曝露モデルを構築した。窒素マスタード曝露群（0.3 LD₅₀、0.5 LD₅₀、LD₅₀群）および溶媒対照群を設定した。高性能液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析（HPLC-MS/MS）多重反応モニタリング（MRM）モードにより、ラット尿中のHN-DNA付加体の種類と含有量を定量分析した。結果は、12種のHN-DNA付加体標準品が0.02～500 ng/mLの範囲で良好な直線性を示し、検出限界（LOD）は0.01～0.02 ng/mL、定量限界（LOQ）は0.02～0.05 ng/mL、バッチ内およびバッチ間の相対標準偏差（RSD）はともに15％未満であった。曝露12時間後、ラット尿中にHN-AN3、HN-GN7、HN-GO6およびHN-Bis-GN7付加体が検出され、その含有量はHN-GN7>HN-Bis-GN7>HN-AN3>HN-GO6の順であった。4種の付加体濃度は曝露量と正の相関を示し、時間の経過とともに徐々に低下した。HPLC-MS/MSを用いたHN曝露後の動物尿中DNA付加体の検出は、非侵襲的な早期検出、正確なトレーサビリティおよび損傷評価を実現し、HNによるDNA損傷修復過程と機構の解明に基礎を提供できる。

窒素マスタード;DNA付加体;バイオマーカー;トレーサビリティ解析;高性能液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析