液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法による血清中37種アミノ酸含量の測定

ZHAO Yun-xia ,  

LI Zi-ying ,  

CHEN Xin ,  

ZHANG Yu-xin ,  

XIAO Wei-min ,  

LIU Ai-ping ,  

LI Mei-fang ,  

JIN Yi-bao ,  

DU Qing-ping ,  

WANG Qi ,  

SU Jia-ting ,  

YANG Guo-wu ,  

FANG Wen ,  

摘要

液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法(LC-MS/MS)に基づき、血清中の37種のアミノ酸を定量分析する方法を確立した。試料は10%スルホサリチル酸水溶液で蛋白質を沈殿させた後、Phenomenex Kinetex F5(250 mm×4.6 mm、5 μm)カラムを用いて分離し、0.02%蟻酸水溶液-アセトニトリルを移動相のグラジエント溶出液として使用した。エレクトロスプレーイオン源(ESI)正イオンモードおよび多重反応モニタリング(MRM)モードで検出した。方法学的検証により、37種のアミノ酸は検出限界から1000 ng/mLの範囲で良好な直線性を示し、相関係数はすべて0.999以上であった。保持時間は4.60~9.16分、検出限界は0.2~10.0 ng/mL、定量下限は0.5~20.0 ng/mLであり、異なる添加濃度での平均回収率は83.2%~118%、相対標準偏差は0.90%~9.4%であった。本法を用いて49例の血清試料を分析したところ、カルノシンおよびシステインは検出されず、ホモシステインの検出率は10.20%、残りの34種のアミノ酸の検出率はいずれも90%以上であった。本法は高い正確性、感度および特異性を有し、血清試料中のアミノ酸含量測定に利用でき、アミノ酸代謝異常に関連する疾患のより包括的な検出データを提供する。

关键词

液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法;アミノ酸;血清;スルホサリチル酸

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