核酸等温鎖置換増幅反応（ISDA）およびCRISPR-Cas12aシステムに基づくmicroRNA-31（miRNA-31）の協調増幅検出法を構築し、逆蛍光増強試験紙（rLFTS）を信号表示プラットフォームとして視覚的検出を実現した。ISDA反応のプライマー配列設計および反応緩衝液の最適化により、miRNA-31の特異的認識と一次信号増幅を達成し、二本鎖DNA生成物を出力してCRISPR-Cas12aが遊離一本鎖DNA（ssDNA）報告分子のトランス切断活性を活性化する。一方で、金ナノプローブがssDNAと検出ライン上のCy5蛍光プローブと結合してサンドイッチ構造を形成することを阻害し、Cy5蛍光を回復させ、これを定量信号として用いることで、miRNA-31の高感度かつ高特異的検出を実現した。本手法は唾液サンプル中のmiRNA-31の検出限界を57.9 amol/Lまで低減し、回収率は91.6％～111％で、定量逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（qRT-PCR）の定量結果と良好な一致性を示し、検出時間はわずか90分である。実験結果は、本手法が操作が容易で感度が高く、検出時間が短いという利点を有し、唾液サンプル中のmiRNA-31の超高感度検出要件を満たすことを示している。

等温鎖置換増幅;CRISPR-Cas12a;逆蛍光増強試験紙;MiRNA-31;核酸検出