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接枝法による大孔性金属固定化親和性クロマトグラフィー担体の調製およびタンパク質分離性能の検討
HOU Heng-yang
,
LI Zi-yang
,
QIAO Juan
,
MA Lei
,
JIN Hai-bo
,
ZHANG Rong-yue
,
DOI:
10.12452/j.fxcsxb.241119540
摘要
本論文は大孔性ポリアクリレート微球を基質とし、メチルメタクリレートエポキシ基-イミノジ酢酸(GMA-IDA)機能性モノマーを配位子として、酸化還元反応により金属親和性クロマトグラフィー担体を調製した。まず、GMAのエポキシ基とIDAのイミノ基との反応によりGMA-IDA機能性モノマーを合成し、その後、酸化還元反応を介して機能性モノマー中の二重結合を接枝重合し大孔ポリマー微球を調製した。最後に、0.1 mol/Lのニッケル溶液下でNi
2+
を錯体化し、FastSep-GMA-IDA-Ni親和性クロマトグラフィー担体を作製した。接枝重合反応における各因子(機能性モノマー濃度、開始剤濃度、反応系のpH、反応温度、反応時間)がタンパク質吸着容量に与える影響を検討し、FastSep-GMA-IDA-Ni親和性クロマトグラフィー担体の最適調製条件を確立した。モデルタンパク質として牛ヘモグロビンを用いたところ、得られたFastSep-GMA-IDA-Ni親和性担体の静的結合容量は最大47.97 mg/mLに達し、市販のNi親和性クロマトグラフィー担体より約25.75%高かった。カップリング法で調製したFastSep-IDA-Ni親和性担体の静的結合容量は12.518 mg/mLであり、接枝法で作製したFastSep-GMA-IDA-Ni親和性担体より著しく低かった。また、FastSep-GMA-IDA-Niは市販担体と比較してタンパク質の伝達効率が優れていた。さらに、ニッケル含有量の増加に伴い、同一条件下で調製されたFastSep-GMA-IDA-Ni親和性担体のタンパク質静的結合容量は飽和に達するまで増加した。結果は、イオン交換容量の増加に伴い錯体化されたニッケル含有量も増加し、最大ニッケル含有量は104.06 μmol/mLに達したことを示した。調製したFastSep-GMA-IDA-Niを用いてCHO細胞で発現されたヘマグルチニン(HA-His)タンパク質の分離精製を行い、良好な分離効果が得られた。
关键词
金属親和性クロマトグラフィー担体;接枝法;ポリマーマイクロスフェア;タンパク質結合容量;分離精製
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