遅延性Edwardsiella tarda（Edwardsiella tarda）は水産養殖における重要な病原菌であり、迅速かつ効率的で現場検査に適した方法は病害の発生を効果的に予防・制御することができる。本論文はローリングサークル増幅（RCA）とクロマトグラフィーストリップ（LFS）技術を組み合わせ、ラテックスマイクロスフェアを標識物として用いることで、RCA-LFS法による遅延性Edwardsiella tarda検出の新規手法を確立した。この菌のgyrb遺伝子に基づきロックドプローブおよび対応する増幅プライマーを設計し、最適化したRCA条件は以下の通りである：ロックドプローブ濃度500 pmol/L、増幅温度61 ℃、増幅時間50分。増幅後、ストリップを増幅産物溶液に直接挿入し肉眼で結果を読み取る。本法は高い特異性を有し、他の一般的な病原菌とは交差反応を示さず、遅延性Edwardsiella tardaのゲノムDNA検出限界は50 ng/mLである。ラテックスマイクロスフェアは一般的なコロイド金標識物と比較して安定で多様な色を有し、色の変化によって複数菌の同時検出が期待される。感染した日本ウナギの検体にRCA-LFS法を適用したところ、通常のゲル電気泳動結果と一致したが、本法は簡便かつ迅速で結果判定が容易であった。RCA-LFSは病原菌の現場検出に著しい推進効果を持つ。

ローリングサークル増幅;遅延性Edwardsiella tarda;ロックドプローブ;ラテックスマイクロスフェア;クロマトグラフィーストリップ