表面プラズモン共鳴技術に基づくキャプチャー法によるCYFRA21-1タンパク質活性濃度定量法の研究

ZHAN Yu-hua ,  

LIU Peng-peng ,  

LIANG Yuan-yuan ,  

YU Xiao-ping ,  

SONG Yang ,  

SHENTU Xu-ping ,  

摘要

表面プラズモン共鳴(SPR)技術に基づく無標準濃度分析(CFCA)法は、既知のタンパク質拡散係数と拡散制限条件下でのタンパク質の活性濃度測定のみを利用し、いかなる標準品も用いずに分析を可能とする。本研究では、CYFRA21-1タンパク質の活性濃度測定のためにキャプチャーフォームのCFCA法(CCFCA)を提案した。結果は、CCFCA法の測定値が0.67 mg/mL、日中精度が4.6%、CFCA法の測定値が0.7 mg/mL、日中精度が6.5%であることを示した。さらに、抗体結合レベルはCFCA使用の制限要因であり、チップの保存方法や活性化方法が不適切な場合、CFCA法の質量移動制限克服要件(QCratio>0.2)を満たさない抗体結合レベルとなり、測定結果の信頼性が低下する。キャプチャー法は、Protein Gタンパク質の助けを借りて抗体の空間的配向を適切にし、低結合レベルでもCCFCA法の検出結果が正確かつ安定していることを示す。従来のCFCA法と比較して、CCFCA法は信頼性が高く、単一チップを再生して複数の抗体―アナライト検出に利用でき、将来のタンパク質活性濃度測定のより良い選択肢となる。

关键词

無標準定量;CYFRA21-1;活性タンパク質濃度;キャプチャー法

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