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膵臓癌PANC-1およびCFPAC-1細胞腫瘍マウスにおける13種類の硫酸アセチルヘパラン二糖のカラム前誘導体化/高性能液体クロマトグラフィー-蛍光検出法
ZHANG Lei
,
WANG Si-ya
,
ZHANG Yun-tao
,
REN Qiang
,
DOI:
10.12452/j.fxcsxb.240913396
摘要
膵臓癌PANC-1およびCFPAC-1細胞腫瘍マウスにおける13種類の硫酸アセチルヘパラン(HS)二糖のカラム前誘導体化/高性能液体クロマトグラフィー-蛍光検出法を確立した。膵臓癌腫瘍サンプルは脱脂、プロテアーゼ消化等の前処理を経てHS二糖を得た後、2-アミノアクリドン(AMAC)誘導体試薬と反応させた。Thermo Scientific HYRERSIL ODS-2C18クロマトグラフィーカラムで分離し、メタノール-60 mmol/L酢酸アンモニウム(pH5.6)の移動相グラジエント溶出を用い、励起波長425 nm、蛍光発光波長520 nmで検出した。結果は、13種類のHS二糖がそれぞれの質量濃度範囲内で良好な直線性(r2≥0.9990)を示し、検出限界(LOD)は0.012~0.313 µg/mL、定量限界(LOQ)は0.117~1.250 µg/mL、精密度の相対標準偏差(RSD)は0.040%~0.63%、日内安定性RSDは0.34%~3.6%、日間安定性RSDは1.8%~6.4%、添加回収率は80.7%~109%、RSDは0.50%~17%であった。2種類の膵臓癌細胞腫瘍マウスの腫瘍組織で9種類のHS二糖が検出され、ΔUA-GlcN(ⅣH)がそれぞれ28627.558 nmol/gおよび66938.786 nmol/gで最も高い割合を占め、次いでΔUA-GlcNAc(ⅣA)およびΔUA-GlcN、6S(ⅡH)が続いた。分子ドッキングの結果、ⅣHはヘパリン結合性上皮成長因子(HB-EGF)と最も強い結合を示し、ⅡHは線維芽細胞成長因子-2(FGF-2)と最も強い結合を示した。HS硫酸化配列の特徴およびHB-EGFとFGF-2との相互作用は膵臓癌の発症、進展過程を調節する。研究結果は膵臓癌の早期治療および診断に役立つ可能性がある。
关键词
膵臓癌; 硫酸アセチルヘパラン; 高性能液体クロマトグラフィー-蛍光検出法; カラム前誘導体化
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