アルカリ性メタノール溶液による超音波抽出と、アーモンド由来のβ-グルコシダーゼ加水分解およびポリアミド分散型固相抽出ステップを組み合わせて、大豆イソフラボンの活性総量を超高性能液体クロマトグラフィーで測定する方法を確立した。試料中のマロン酸及びアセチル型大豆イソフラボングリコシドはアルカリ条件下で基本型グリコシドに加水分解され、β-グルコシダーゼの作用により糖基が脱離して対応するアグリコンに変換される。試料中の12種類の異なる形態の大豆イソフラボンは3種類の大豆イソフラボンアグリコン（ダイゼイン、ゲニステイン、グリシテイン）に変換され、ポリアミド粉末を用いた分散型固相抽出とC18逆相クロマトグラフィーカラム（2.1 mm i.d.×50 mm、1.8 µm）により分離される。結果は、ダイゼイン、ゲニステイン及びグリシテインが3分以内にベースライン分離され、3種類のイソフラボンアグリコンの標準曲線相関係数（r2）はすべて0.999以上、総イソフラボンの回収率は94.3%～102%、相対標準偏差（RSD、n=6）は5.0%未満で、高い精度と再現性を示した。本法は試料中のすべてのアグリコンを検出してイソフラボンの総量を算出することで、分離度、精度および測定コストに関連する課題を軽減する。体内におけるイソフラボンの代謝吸収機構と生理的効果を考慮すると、アグリコンの総量で計算することが実際のイソフラボン活性レベルをより科学的に反映し、グリコシドとアグリコンの単純加算によるイソフラボン含量の過大評価を回避する。

大豆イソフラボン;ポリアミド（PA）;分散型固相抽出（d-SPE）;β-グルコシダーゼ;超高性能液体クロマトグラフィー（UPLC）