Une méthode d’analyse de 12 nucléosides normaux et modifiés dans l’ARNm des cellules tumorales a été établie. Après extraction de l’ARN total des échantillons de cellules tumorales, purification de l’ARNm et hydrolyse de l’ARNm, 8-bromoguanosine (8Br-G) a été ajouté comme étalon interne. En utilisant une phase mobile aqueuse contenant 0,1 % d’acide formique et une phase mobile méthanolique avec 0,1 % d’acide formique, la séparation a été effectuée sur une colonne chromatographique Agilent RRHD SB-C18 (2,1 mm×50 mm, 1,8 μm), avec une source d’ionisation par électrospray en mode ions positifs (ESI+) et un mode de surveillance des réactions multiples (MRM). Cette méthode répond aux exigences de validation méthodologique, les 12 nucléosides normaux et modifiés montrent une bonne linéarité dans une certaine plage de concentration, les coefficients de corrélation (r) sont tous supérieurs à 0,99, la limite de quantification (LOQ) est de 0,17 à 3,13 ng/mL, la limite de détection (LOD) de 0,08 à 1,56 ng/mL. La méthode a été appliquée aux lignées cellulaires du carcinome nasopharyngé humain 5-8F, de cancer du col de l’utérus Hela et de cellules épithéliales du rein embryonnaire humain 293T, détectant avec succès plusieurs niveaux de nucléosides modifiés. La méthode utilise une faible quantité de cellules (2×10^6 par échantillon), un temps d’analyse court (6 min par échantillon) et une haute sensibilité, offrant une méthode analytique efficace pour la recherche sur le cancer et le diagnostic clinique.

nucléoside; nucléoside modifié; ARNm; cellules tumorales; chromatographie liquide ultra-performante-spectrométrie de masse en tandem (UPLC-MS/MS)