Pour relever le défi technique lié à la demande élevée en quantité initiale d'échantillons pour l'analyse glycomique, cette étude a développé une technique de préparation des N-glycanes à partir d'échantillons en très faible quantité (GPAT). En chargeant séparément des phases stationnaires C18 et HILIC dans l'embout de la pipette (Tip), elle réalise une digestion protéique in situ, une libération et un enrichissement des N-glycanes en une seule étape. Par rapport à la stratégie d'analyse du N-glycome basée sur la préparation d'échantillons assistée par filtration (FASP) largement utilisée actuellement, la technique GPAT permet la libération et l'enrichissement in situ des N-glycanes à partir de quantités micro d'immunoglobuline G (IgG) et de protéines extraites de cellules humaines HepG2 du cancer du foie, réduisant la quantité initiale d’échantillon de 90%. Ainsi, 20 et 39 N-glycanes ont été détectés respectivement à partir de 10 μg d'IgG et de 10 μg de protéines des cellules HepG2. Par ailleurs, 49 N-glycanes ont été détectés dans 10 μg de protéines urinaires extraites d’urines de 6 sujets sains (3 hommes, 3 femmes). Cette méthode offre une stratégie d’analyse quantitative simple et rapide des N-glycanes à partir d’échantillons complexes de très faible quantité, posant une base pour la promotion ultérieure des méthodes de glycomique.

N-glycanes;glycomique;protéines urinaires;spectrométrie de masse en tandem par désorption/ionisation laser assistée par matrice en temps de vol