Une méthode analytique a été établie pour la détermination de la progestérone dans le sérum humain par chromatographie liquide ultra-performante couplée à la spectrométrie de masse en tandem (UPLC-MS/MS). Les échantillons de sérum ont été extraits en phase liquide-liquide (LLE) avec de l’acétate d’éthyle et de l’hexane n, puis séparés par gradient sur une colonne chromatographique Acquity UPLC BEH C18 (2,1 mm×100 mm, 1,7 μm) avec un temps d’analyse chromatographique de 5 min. L’ionisation par électrospray (ESI) en mode ion positif et la détection en mode suivi des réactions multiples (MRM) ont été utilisées, avec quantification par étalon interne isotopique. L’effet d’une extraction en deux étapes sur le rendement de la progestérone, les effets des différentes phases mobiles sur la séparation et la stabilité des échantillons ont été étudiés, montrant que l’utilisation du méthanol avec 0,1 % d’ammoniaque comme phase mobile offrait une meilleure séparation. Dans des conditions optimisées, la progestérone présentait une bonne linéarité dans la plage de 10 à 10 000 pg/mL (r2=0,9998). Les limites de détection et de quantification étaient respectivement de 5 et 10 pg/mL; le rendement moyen de récupération était de 91,5 % à 106 %, l’écart-type relatif intra-journalier (RSD) de 1,2 % à 8,2 %, et l’écart-type relatif inter-journalier de 4,1 % à 9,1 %. La méthode a été appliquée à 30 échantillons de sérum réels, la concentration en progestérone variant de 0,0502 à 1,3635 ng/mL, toutes dans la plage physiologique normale. Cette méthode est sensible, précise et fiable, et peut être utilisée pour la détection des niveaux physiologiques de progestérone dans les échantillons de sérum clinique.

progestérone; dilution isotopique; chromatographie liquide ultra-performante couplée à la spectrométrie de masse en tandem (UPLC-MS/MS); extraction liquide-liquide (LLE); sérum