Une caractérisation structurelle complète a été réalisée pour un étalon d’anticorps monoclonal de type IgG1. La masse moléculaire précise de l’anticorps avant et après le déglycosylation N a été déterminée par spectrométrie de masse Exactive plus EMR, et la masse moléculaire complète a été calculée entre 148 285,0 et 149 020,8, la masse après déglycosylation complète est de 145 810,4, et la teneur en N-glycanes est de 1,67 % à 2,15 %. La méthode d’électrophorèse capillaire en temps réel avec focalisation isoélectrique intégrale de la colonne (WCID-cIEF) a été optimisée, montrant que le point isoélectrique de l’anticorps variait de 8,21 à 8,74, avec un pic principal à 8,61 et une teneur relative de 61,43 %. Ensuite, la chromatographie par échange d’ions a été utilisée pour détecter l’hétérogénéité de charge, révélant un pic basique à 4,1 %, un pic acide à 23,9 % et un pic principal à 72,0 %, en accord avec les résultats WCID-cIEF, ce qui confirme une bonne reproductibilité entre les méthodes. L’analyse des cartes peptidiques avant et après déglycosylation a permis d’obtenir la distribution des glycopeptides, d’identifier les sites de modification glucidique et les régions déterminantes complémentaires (CDR) des chaînes lourdes et légères, les sites d’oxydation de la méthionine (M) et le taux d’oxydation, ainsi que l’analyse des cartes peptidiques avant et après réduction de l’anticorps a permis d’élucider les ponts disulfures. Les résultats suggèrent également qu’il n’y a pas de modification glucidique en C-terminal pour cet étalon d’anticorps.

étalon d’anticorps;masse moléculaire;point isoélectrique;hétérogénéité de charge;carte peptidique