Les laboratoires conventionnels rencontrent fréquemment des difficultés lors de la préparation d'échantillons microbiologiques pour la microscopie électronique à balayage (MEB) en raison du manque de réactifs de fixation et d'équipements de séchage au point critique. Pour résoudre ce problème, le permanganate de potassium (KMnO₄) a été choisi comme agent fixateur cellulaire. Des améliorations et analyses des méthodes de préparation ont été réalisées sur les étapes clés de fixation et séchage dans la préparation des échantillons MEB, dans le but d’établir une méthode universelle de préparation d’échantillons microbiologiques pour MEB, sûre, économique et peu dépendante du matériel. Escherichia coli, Bacillus subtilis et Saccharomyces cerevisiae ont été étudiés. Les cellules ont subi une fixation simple au glutaraldéhyde (fixation GA), une double fixation au glutaraldéhyde et tétraoxyde d’osmium (fixation GA-OT), et une double fixation glutaraldéhyde-permanganate de potassium (fixation GA-PP). Différents modes de séchage ont été combinés : lyophilisation, séchage à l'air, séchage à basse température, séchage à température basse-moyenne, et séchage au point critique. L’imagerie MEB a été utilisée pour évaluer l’impact de ces traitements sur la morphologie et l’intégrité des cellules. Les résultats montrent que la fixation GA-OT et GA-PP fixe la morphologie cellulaire bien mieux que la fixation simple GA ; la lyophilisation et le séchage au point critique préservent mieux la morphologie native. Le protocole GA-PP combiné à la lyophilisation conserve efficacement la structure morphologique de trois types de microorganismes (Gram-négatif, Gram-positif, et levures eucaryotes unicellulaires), répondant aux exigences de la MEB, avec des avantages économiques, une bonne généralisation, une haute sécurité et un fort potentiel de diffusion. Cette méthode fournit une alternative viable pour les laboratoires conventionnels en préparation d’échantillons MEB microbiologiques.

microorganismes; préparation MEB; double fixation glutaraldéhyde-KMnO₄; séchage