Dosage par chromatographie liquide ultra-performante couplée à la spectrométrie de masse en tandem des cinq métabolites endogènes dans le sérum de rats immunodéprimés induits par la cyclophosphamide

XU Ai-li ,  

WU Min-shan ,  

CHEN Wei-tao ,  

ZENG Zhi-hao ,  

XIAO Guan-lin ,  

LU Wen-sen ,  

LI Yang-xue ,  

摘要

Une méthode de dosage de cinq métabolites endogènes dans le sérum de rats présentant une immunosuppression induite par la cyclophosphamide a été établie en utilisant la chromatographie en phase liquide ultra-performante couplée à la spectrométrie de masse en tandem (UPLC-MS/MS) : glutathion (GSH), DL-glutamine (DL-Gln), acide glutamique (GA), 1-O-hexadécyl-sn-glycérophosphocholine (LPC(0-16∶0)) et acide arachidonique (AA). Après précipitation des protéines dans les échantillons de sérum, une colonne chromatographique ACQUITY Poroshell 120 SB-C18 (2,1 mm × 100 mm, 2,7 µm) avec une phase mobile méthanol-solution aqueuse d’acétate d’ammonium 5 mmol·L-1 a été utilisée pour un élution en gradient afin de doser le GSH, DL-Gln, le GA et l'AA; une colonne ACQUITY UPLC BEH Amide (2,1 mm × 150 mm, 1,7 µm) avec une phase mobile acétonitrile-solution aqueuse de formiate d’ammonium 5 mmol·L-1 a été utilisée pour un élution en gradient afin de doser le LPC(0-16∶0). La spectrométrie de masse a été réalisée avec une source d’ionisation par électrospray (ESI) en modes ion positif et négatif, quantification par méthode de standard interne. Les résultats montrent une bonne linéarité des cinq métabolites dans les plages de concentration correspondantes (r > 0,995), limites de détection de 0,043 à 0,178 ng·mL-1, et limites de quantification de 0,145 à 0,592 ng·mL-1. Cette méthode est simple, rapide et sensible, adaptée au dosage des métabolites endogènes dans le sérum de rat et fournit une base expérimentale pour l’étude du mécanisme d’action des médicaments immunosuppresseurs.

关键词

chromatographie liquide ultra-performante couplée à la spectrométrie de masse en tandem; sérum; métabolites endogènes; immunosuppression

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