La protéine kinase A (PKA) joue un rôle essentiel dans divers processus biologiques, régulant les signaux cellulaires, la prolifération, la différenciation et l'apoptose. Par conséquent, la surveillance et l'inhibition de l'activité de la PKA revêtent une grande importance en diagnostic médical et découverte de médicaments. Cet article construit une plateforme de détection électrochimique basée sur le code-barres ADN (DNA barcode) et la stratégie d'amplification par réaction en chaîne par cercle (RCA) pour analyser l'activité de la PKA et le criblage de ses inhibiteurs. Des composites cages d'or nanométriques/disulfure de molybdène (AuNCs/MoS₂) sont utilisés comme matériau de modification d'électrode, les chaînes peptides substrats s'auto-assemblent par liaison or-soufre à la surface de l'électrode modifiée (AuNCs/MoS₂/GCE), où la phosphorylation terminale induite par PKA se produit, conduisant à une liaison hautement spécifique avec des particules d'or marquées par barcode ADN (DNA barcode-AuNPs). Sous l'action de la ligase T4 ADN, les chaînes d'ADN de DNA barcode-AuNPs s'hybrident avec l'ADN matriciel circulaire formant une sonde verrouillable. L'ajout de la polymérase phi29 ADN et des dNTP induit une réaction RCA. Le produit RCA forme un complexe hémin (Hemin) possédant une activité catalytique mimant l'activité de la catalyse par G-quadruplex hémin, amplifiant ainsi le signal électrochimique et permettant d'analyser l'activité de la PKA. La plage de réponse linéaire de cette plateforme pour l'analyse de l'activité de la PKA est de 0,005~100 U/mL, avec une limite de détection (LOD) de 1 mU/mL. Cette méthode peut être utilisée pour le criblage d'inhibiteurs de la PKA et l'analyse de l'activité de la PKA dans les lysats de cellules mammaires cancéreuses humaines (MCF-7) et de cellules cancéreuses du foie (HepG-2), offrant ainsi une nouvelle approche pour l'analyse de l'activité des kinases.

code-barres ADN;amplification RCA;protéine kinase;phosphorylation;capteur électrochimique