Une méthode quantitative basée sur la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS) a été établie pour analyser 37 acides aminés dans le sérum. Après précipitation des protéines avec une solution aqueuse à 10 % d’acide sulfosalicylique, la séparation a été réalisée sur une colonne chromatographique Phenomenex Kinetex F5 (250 mm × 4,6 mm, 5 μm) en utilisant une phase mobile en gradient d’une solution aqueuse à 0,02 % d’acide formique et d’acétonitrile. La détection s’est effectuée en mode ionisation par électrospray positive (ESI) et surveillance multiple des réactions (MRM). La méthode a été validée méthodologiquement; les résultats montrent une bonne linéarité des 37 acides aminés dans une plage allant de la limite de détection à 1000 ng/mL, avec des coefficients de corrélation supérieurs à 0,999, des temps de rétention allant de 4,60 à 9,16 min, des limites de détection comprises entre 0,2 et 10,0 ng/mL, et des limites de quantification de 0,5 à 20,0 ng/mL. Le taux moyen de récupération pour différentes concentrations ajoutées variait entre 83,2 % et 118 %, avec un écart type relatif de 0,90 % à 9,4 %. La méthode a été appliquée à l’analyse de 49 échantillons de sérum; la carnosine et la cystéine n’ont pas été détectées, le taux de détection de l’homocystéine était de 10,20 % et celui des 34 autres acides aminés dépassait 90 %. Cette méthode présente une grande précision, sensibilité et spécificité, et peut être utilisée pour la détermination du contenu en acides aminés dans les échantillons de sérum, fournissant des données plus complètes pour les maladies associées aux troubles du métabolisme des acides aminés.
关键词
chromatographie liquide-spectrométrie de masse en tandem;acides aminés;sérum;acide sulfosalicylique