Une méthode combinant la réaction d'amplification isotherme par déplacement de chaîne nucléique (ISDA) et le système CRISPR-Cas12a a été développée pour la détection du microARN-31 (miRNA-31) en utilisant une bandelette de test à renforcement de fluorescence inversée (rLFTS) comme plateforme de signal pour une détection visuelle. En optimisant la conception des amorces pour la réaction ISDA et le tampon réactionnel, une reconnaissance spécifique de miRNA-31 a été réalisée ainsi qu'un premier renforcement du signal, produisant un ADN double brin activant l'activité de clivage trans de CRISPR-Cas12a sur l'ADN simple brin (ssDNA) libre en tant que molécule rapporteur. Cela inhibe également la liaison des sondes d'or colloïdales formant une structure en sandwich avec la sonde fluorescente Cy5 sur la ligne de détection, restaurant ainsi la fluorescence Cy5. Cette détection quantitative permet une sensibilité et une spécificité élevées pour miRNA-31. La limite de détection dans les échantillons de salive est aussi basse que 57,9 amol/L, avec un taux de récupération de 91,6 % à 111 %, et les résultats de détection concordent bien avec ceux de la réaction de polymérisation en chaîne inverse quantitative (qRT-PCR). Le temps de détection est de 90 minutes seulement. Les résultats expérimentaux montrent que la méthode est simple à manipuler, hautement sensible et rapide, répondant aux besoins de détection ultrasensible de miRNA-31 dans les échantillons de salive.

Amplification isotherme par déplacement de chaîne;CRISPR-Cas12a;Bandelette de test à renforcement de fluorescence inversée;MiRNA-31;Détection des acides nucléiques