Méthode de dérivation avant colonne / chromatographie liquide à haute performance avec détection par fluorescence pour la détermination de 13 types de disaccharides d'héparane sulfate acétylé dans les souris porteuses de tumeurs de cellules de cancer du pancréas PANC-1 et CFPAC-1
Une méthode de dérivation avant colonne / chromatographie liquide à haute performance avec détection par fluorescence a été établie pour 13 types de disaccharides d'héparane sulfate acétylé (HS) dans des souris porteuses de tumeurs de cellules de cancer du pancréas PANC-1 et CFPAC-1. Les échantillons de tumeur du cancer du pancréas ont subi un traitement préalable comprenant le dégraissage et la protéolyse, pour obtenir des disaccharides HS, qui ont ensuite réagi avec le réactif de dérivation 2-aminoacridone (AMAC). La séparation a été réalisée sur une colonne Thermo Scientific HYRERSIL ODS-2C18 avec un élution en gradient de méthanol/60 mmol/L d'acétate d'ammonium (pH 5.6), la détection ayant lieu à une longueur d'onde d'excitation de 425 nm et d'émission de 520 nm. Les résultats ont montré une bonne linéarité pour les 13 disaccharides HS dans leurs plages de concentration respectives (r2≥0.9990), les limites de détection (LOD) étaient de 0.012 à 0.313 µg/mL et les limites de quantification (LOQ) de 0.117 à 1.250 µg/mL. La précision, exprimée par l'écart-type relatif (RSD), variait de 0.040% à 0.63%, la stabilité intrajournalière avait un RSD de 0.34% à 3.6%, la stabilité interjournalière un RSD de 1.8% à 6.4%, avec un taux de récupération ajouté de 80.7% à 109% et un RSD de 0.50% à 17%. Neuf types de disaccharides HS ont été détectés dans les tissus tumoraux de souris porteuses de deux types de cellules cancéreuses du pancréas, où le ΔUA-GlcN (ⅣH) représentait la plus grande proportion à 28627.558 nmol/g et 66938.786 nmol/g respectivement, suivi du ΔUA-GlcNAc (ⅣA) et du ΔUA-GlcN, 6S (ⅡH). Les résultats du docking moléculaire ont montré que le ⅣH avait la plus forte affinité de liaison avec le facteur de croissance épidermique lié à l’héparine (HB-EGF), et que le ⅡH avait la plus forte affinité de liaison avec le facteur de croissance des fibroblastes-2 (FGF-2). Les caractéristiques des séquences sulfates HS et leurs interactions avec HB-EGF et FGF-2 régulent le processus de développement du cancer du pancréas. Ces résultats peuvent aider au diagnostic et au traitement précoce du cancer du pancréas.
关键词
Cancer du pancréas; Héparane sulfate acétylé; Chromatographie liquide à haute performance avec détection par fluorescence; Dérivation avant colonne