Es wurde eine Analysemethode für 12 normale und modifizierte Nukleoside im mRNA von Tumorzellen etabliert. Nach der Gesamt-RNA-Extraktion aus Tumorzellproben, mRNA-Reinigung und mRNA-Hydrolyse wurde 8-Bromguanosin (8Br-G) als interne Standardsubstanz hinzugefügt. Mit 0,1 % Ameisensäure in Wasser und 0,1 % Ameisensäure in Methanol als mobilen Phasen erfolgte die Trennung an einer Agilent RRHD SB-C18-Säule (2,1 mm×50 mm, 1,8 μm). Die Detektion erfolgte durch Elektrospray-Ionisation im Positivmodus (ESI+) und Multiple Reaction Monitoring (MRM). Die Methode entspricht den Anforderungen der methodischen Validierung, 12 normale und modifizierte Nukleoside zeigen im bestimmten Konzentrationsbereich eine gute lineare Beziehung, die Korrelationskoeffizienten (r) sind alle größer als 0,99, die Quantifizierungsgrenze (LOQ) liegt zwischen 0,17 und 3,13 ng/ml, die Nachweisgrenze (LOD) zwischen 0,08 und 1,56 ng/ml. Die etablierte Methode wurde auf die menschlichen Nasopharynxkarzinomzelllinien 5-8F, das menschliche Zervixkarzinom Hela und menschliche embryonale Nierenepithelzellen 293T angewendet, wobei erfolgreich verschiedene modifizierte Nukleosidspiegel nachgewiesen wurden. Die Methode benötigt eine geringe Zellanzahl (2×10^6 pro Probe), eine kurze Analysezeit (6 min pro Probe) und hohe Empfindlichkeit, wodurch eine effektive Analysemethode für Krebsforschung und klinische Diagnostik bereitgestellt wird.

Nukleosid; modifiziertes Nukleosid; mRNA; Tumorzellen; Ultra-Hochleistungsflüssigchromatographie-Tandem-Massenspektrometrie (UPLC-MS/MS)