Es wurde eine analytische Methode zur Bestimmung von Progesteron im menschlichen Serum mittels ultra-hochauflösender Flüssigkeitschromatographie gekoppelt mit Tandem-Massenspektrometrie (UPLC-MS/MS) entwickelt. Serumproben wurden einer Flüssig-flüssig-Extraktion (LLE) mit Ethylacetat und n-Hexan unterzogen und anschließend auf einer Acquity UPLC BEH C18 Säule (2,1 mm×100 mm, 1,7 μm) gradientengetrennt. Die Chromatographiedauer betrug 5 Minuten. Es wurde die Elektrospray-Ionisation (ESI) im positiven Ionisationsmodus und der Mehrfachreaktionsüberwachungsmodus (MRM) mit isotopeninternem Standard zur Quantifizierung verwendet. Untersucht wurden der Effekt einer zweistufigen Extraktion auf die Progesteron-Gewinnung, die Trennleistung verschiedener mobiler Phasen sowie die Stabilität der Proben. Die Ergebnisse zeigten, dass eine mobile Phase aus Methanol mit 0,1 % Ammoniak eine bessere Trennung erzielte. Unter optimierten Bedingungen zeigte Progesteron eine gute Linearisierung im Bereich von 10 bis 10.000 pg/mL (r2=0,9998), die Nachweis- und Quantifizierungsgrenzen betrugen 5 bzw. 10 pg/mL; die mittlere Späterholung lag bei 91,5 % bis 106 %, die relative Standardabweichung (RSD) innerhalb eines Tages bei 1,2 % bis 8,2 %, die tagesübergreifende RSD bei 4,1 % bis 9,1 %. Die Methode wurde an 30 realen Serumproben angewendet, die Progesteron-Konzentrationen lagen zwischen 0,0502 und 1,3635 ng/mL und alle innerhalb des physiologischen Normalbereichs. Die Methode ist sehr sensitiv, genau und zuverlässig und kann zur Bestimmung des physiologischen Progesteronspiegels in klinischen Serumproben verwendet werden.

Progesteron; Isotopenverdünnung; Ultra-hochauflösende Flüssigkeitschromatographie gekoppelt mit Tandem-Massenspektrometrie (UPLC-MS/MS); Flüssig-flüssig-Extraktion (LLE); Serum