Es wurden vier Stereoisomere des Benzopyren-DNA-Addukts — anti-BPDE-N2-dG (anti-diol-Epoxid-Benzopyren-Deoxyguanosin-Addukt) in vitro synthetisiert. Durch Optimierung der Reaktionsbedingungen wurde die Ausbeute der Synthese der vier anti-BPDE-N2-dG Stereoisomere im Vergleich zu bestehenden Methoden mehr als verdoppelt, was Standardmaterialien für die quantitative Bestimmung in Organismen bereitstellt. Zum ersten Mal wurde eine Pentafluorphenyl-Säule für die chromatographische Trennung dieser Stereoisomere eingesetzt. Durch Optimierung der chromatographischen Bedingungen wurde mit einer konventionellen Pentafluorphenyl-Säule (250 mm × 4,6 mm, 5 μm) unter Verwendung einer mobilen Phase aus Acetonitril und 0,1 % Ameisensäurewasser (22,5:77,5) bei einer Flussrate von 1,2 ml/min innerhalb von 45 Minuten eine Trennung und Reinigung der vier Stereoisomere erzielt. Im Vergleich dazu benötigt eine herkömmliche C18-Säule (250 mm × 4,6 mm, 5 μm) 160 Minuten und eine Phenylsäule (250 mm × 4,6 mm, 5 μm) 85–100 Minuten für die chromatographische Trennung, wodurch die Trennzeit verkürzt und die Reinigungseffizienz verbessert wird. Die Stereoisomere wurden mittels UV-Absorptionsspektroskopie, Massenspektrometrie und zirkularem Dichroismus charakterisiert und die Elutionsreihenfolge als trans(-), trans(+), cis(+), cis(-)-anti-BPDE-N2-dG bestimmt. Darüber hinaus kann bei der Detektion der vier anti-BPDE-N2-dG Stereoisomer-Standards mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie gekoppelt mit Tandem-Massenspektrometrie (HPLC-MS/MS) durch Verwendung der konventionellen Pentafluorphenyl-Säule die Trennung und Detektion innerhalb von 30 Minuten abgeschlossen werden, was die Effizienz im Vergleich zur Phenylsäule mit gleicher Spezifikation, die 60 Minuten benötigt, verbessert.

Benzopyren-DNA-Addukt; anti-BPDE-N2-dG; Pentafluorphenyl-Säule; Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC); Tandem-Massenspektrometrie