Um die technische Herausforderung zu bewältigen, dass für die Glykom-Analyse ein hoher Anfangsprobenbedarf besteht, entwickelte diese Studie eine Methode zur Vorbereitung von N-Glykanen aus Mikromengen (GPAT). Durch das separate Befüllen von C18- und HILIC-Materialien im Pipettenspitze (Tip) wird eine einstufige ortsständige Proteinverdauung, Freisetzung und Anreicherung der N-Glykane realisiert. Im Vergleich zur derzeit weit verbreiteten N-Glykom-Analyse-Strategie auf Basis der Filter-unterstützten Probenvorbereitung (FASP) ermöglicht die GPAT-Technik die ortsständige Freisetzung und Anreicherung von N-Glykanen aus Mikromengen von Immunglobulin G (IgG) und aus humanen Leberkrebs-HepG2-Zellproteinen, reduziert die Anfangsprobemenge um 90% und erlaubt den Nachweis von 20 bzw. 39 N-Glykanen aus 10 μg IgG und 10 μg HepG2 Zellproteinen. Aus 10 μg Urinproteinen, die aus dem Urin von 6 gesunden Personen (3 Männer, 3 Frauen) extrahiert wurden, konnten 49 N-Glykane nachgewiesen werden. Diese Methode ermöglicht eine einfache und schnelle quantitative Analyse von N-Glykanen in mikromengen komplexer Proteinproben und bildet die Grundlage für die weitere Verbreitung der Glykom-Methoden.

N-Glykane;Glykomik;Urinprotein;Matrix-unterstützte Laser-Desorptions/Ionisations-Flugzeit-Tandem-Massenspektrometrie