Bestimmung des Gehalts an Rinder Typ I Kollagen mittels HPLC-MS

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摘要

Eine Methode zur Bestimmung des Gehalts an Rinder Typ I Kollagen basierend auf Hochleistungsflüssigkeitschromatographie-Massenspektrometrie unter Verwendung eines charakteristischen Peptids wurde entwickelt. Kollagenschwammproben wurden enzymatisch hydrolysiert und anschließend chromatographisch getrennt. Die Messung erfolgte im positiven Elektrospray-Ionisationsmodus und retention time-dependent Single Ion Monitoring (SIM) mit externer Kalibrierung. Das spezifische Peptid für das Typ I Rinderkollagen, erhalten durch trypsinspezifische enzymatische Hydrolyse, ist GFSGLDGAK. Dieses Peptid zeigt im Massenkonzentrationsbereich von 0,645 bis 21,5 μg/mL eine gute Linearität (r2=0,9994); die Nachweisgrenze der Methode liegt bei 6,45×10-4 μg/mL; bei drei Spike-Leveln von 3,10, 2,48 und 1,55 μg/mL lag die durchschnittliche Wiederfindungsrate zwischen 98,2 % und 102 %; die relative Standardabweichung der Peakfläche (n=6) betrug 0,80 %. Kollagenschwammproben wurden auf Homogenität, Stabilität und Quantifikation geprüft, um die Wirksamkeit der Methode sicherzustellen und die Produktqualität zu validieren. Der gemessene Gehalt an Typ I Rinderkollagen betrug (0,926 ± 0,014) mg/mg. Die Methode ist einfach, schnell, reproduzierbar und stabil und ermöglicht eine effektive Quantifizierung von Typ I Rinderkollagen.

关键词

Hochleistungsflüssigkeitschromatographie-Massenspektrometrie (HPLC-MS); charakteristisches Peptid; Rinder Typ I Kollagen; Quantifizierung

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