Basierend auf Offline-Zweidimensionalchromatographie und Exoglycosidase-Analyse wurde eine effiziente und zuverlässige Methode zur Strukturidentifikation von N-Glykanketten von Glykoproteinen etabliert. Zunächst wurde die schwache Anionenaustauschchromatographie zur Vorbereitung von Glykanketten mit unterschiedlichen Sialylierungsgraden eingesetzt, anschließend wurde die laserinduzierte Kapillarelektrophorese mit Laserinduzierter Fluoreszenz (CE-LIF) mit Exoglycosidasen zur Strukturidentifikation kombiniert. Nach fluoreszenzmarkierter Trennung und Vorbereitung der Glykanketten wurde eine Top-down-Digestion sowie eine Bottom-up-Identifikation durchgeführt, wobei insgesamt 18 Glykantypen im IgG nachgewiesen wurden. Diese Strategie wurde weiter auf die Analyse von N-Glykanketten im menschlichen Serum angewandt, wobei die relativen Mengen verschiedener Sialylierungsgrade der Glykane S1∶S2∶S3∶S4=4.7∶20.9∶6∶1 betrugen. Die Ergebnisse zeigen, dass die in menschlichem Serum hochreichen neutralen Glykane der Struktur der neutralen Glykane im IgG sehr ähnlich sind, und der am häufigsten vorkommende N-Glykantyp im Serum ist das disialylierte, zweifach verzweigte FA2G2S2. Die Methode zeigt ein gewisses Anwendungspotenzial in der strukturellen Charakterisierung von N-Glykanketten von Glykoproteinen.

Offline-Zweidimensionalchromatographie; Kapillarelektrophorese; Immunglobulin G; N-Glykanketten; menschliches Serum