Eine umfassende strukturelle Charakterisierung des monoklonalen Antikörper-Referenzmaterials vom Typ IgG1 wurde durchgeführt. Die genaue Molekularmasse des Antikörpers vor und nach Entfernung der N-Glykane wurde mittels Exactive plus EMR-Massenspektrometrie bestimmt und die vollständige Molekularmasse auf 148.285,0 bis 149.020,8 berechnet, die vollständige Masse nach Deglycosylierung beträgt 145.810,4, der N-Glykan-Gehalt liegt bei 1,67 % bis 2,15 %. Die Methode der Echtzeit-kapillarelektrophoretischen isoelektrischen Fokussierung (WCID-cIEF) wurde optimiert, die Ergebnisse zeigten, dass der isoelektrische Punkt des Antikörpers zwischen 8,21 und 8,74 liegt, wobei der Hauptisoelektrische Punkt bei 8,61 mit einem relativen Anteil von 61,43 % liegt. Anschließend wurde Ionenaustauschchromatographie verwendet, um die Ladungsheterogenität zu erfassen, wobei festgestellt wurde, dass der basische Peak 4,1 %, der saure Peak 23,9 % und der Hauptpeak 72,0 % beträgt, was mit den WCID-cIEF-Ergebnissen übereinstimmt und eine gute Reproduzierbarkeit zwischen den Methoden bestätigt. Durch Analyse der Peptidkarten vor und nach der Deglycosylierung wurden Informationen zur Glykopeptidverteilung gewonnen, Glykosylierungsstellen sowie die komplementären Bestimmungsbereiche (CDR) der schweren und leichten Ketten, Methionin(M)-Oxidationsstellen und Oxidationsraten identifiziert und durch Analyse der Peptidkarten vor und nach der Antikörper-Reduktion Disulfidbrücken analysiert. Die Studienergebnisse deuten außerdem darauf hin, dass dieses Antikörper-Referenzmaterial keine C-terminale Glykosylierungsmodifikation aufweist.

Antikörper-Referenzmaterial;Molekularmasse;isoelektrischer Punkt;Ladungsheterogenität;Peptidkarte