Mit der Entwicklung von Antikörperpräparaten wie monoklonalen Antikörpern und bispezifischen Antikörpern ergeben sich bei der nachgelagerten Reinigung größere Herausforderungen bei der Entfernung von Aggregaten, Wirtszellproteinen und strukturell ähnlichen Nebenprodukten. Obwohl die Protein A/G Affinitätschromatographie eine hochselektive Antikörperbindung ermöglicht, ist die Fähigkeit zur Unterscheidung von Antikörpermonomeren, Aggregaten und strukturell ähnlichen Nebenprodukten begrenzt, was orthogonale Reinigungsschritte mit spezifischer Selektivität erfordert. In den letzten Jahren hat die Mischmodus-Chromatographie Kationenaustausch/hydrophobe Wechselwirkung (CEX/HIC) aufgrund der synergistischen Nutzung elektrostatischer und hydrophober Wechselwirkungen unter wässrigen Bedingungen Aufmerksamkeit erlangt. Dieser Artikel konzentriert sich auf das Design der stationären Phase von CEX/HIC, gibt einen Überblick über die multiplen Retentionsmechanismen sowie die Auswirkungen der Matrix, Porenstruktur, Spacerarm, Ligandzusammensetzung und Immobilisierungsmethode auf Proteinsorption, Elution und Selektivität der Trennung. Anhand von Beispielen zur Reinigung monoklonaler und bispezifischer Antikörper wird die Anwendung bei der Entfernung von Aggregaten, Wirtszellproteinen und strukturell ähnlichen Nebenprodukten zusammengefasst. Der Artikel kann als Referenz für Mediendesign und Optimierung von Antikörperreinigungsprozessen dienen.

Mischmodus-Chromatographie; Kationenaustausch; hydrophobe Wechselwirkung; Ligandendesign; monoklonale Antikörper; bispezifische Antikörper