UPLC-MS/MS-Methode zur Bestimmung von 13 monohydroxylierten Lipidmediatoren in normalen und rheumatoiden Ratten

JIN Bo ,  

CHEN Yi-yang ,  

LIANG Ya-jing ,  

HU Xue-xin ,  

MA Chen ,  

摘要

In der Arbeit wurde eine Methode der ultra-hochleistungsflüssigkeitschromatographie gekoppelt mit Tandem-Massenspektrometrie (UPLC-MS/MS) zur Bestimmung des Gehalts von 13 monohydroxylierten Lipidmediatoren in Herz-, Leber-, Milz-, Lungen- und Nierengewebe von normalen Ratten und Ratten mit Rheumatoider Arthritis entwickelt, darunter 7 Hydroxy-Eikosatetraensäuren (HETE) und 6 Hydroxy-Docosahexaensäuren (HDHA). Die Probenvorbereitung erfolgte mittels Flüssig-Flüssig-Extraktion mit Ethylacetat, das 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (BHT) als Extraktionsmittel enthielt. Die methodische Validierung ergab, dass die Nachweisgrenzen (LOD) für die 13 Analytstoffe zwischen 0,1 und 1,0 ng/mL liegen, die Quantifizierungsgrenzen (LOQ) zwischen 0,5 und 2,0 ng/mL. Der lineare Bereich der Analytstoffe, mit Ausnahme von 4-HDHA, liegt zwischen LOQ und 1000 ng/mL mit Korrelationskoeffizienten über 0,99. Die Rückgewinnung der 13 Analytstoffe bei drei Zusatzleveln lag zwischen 82,5 % und 118 %, die relative Standardabweichung (RSD) unter 7,5 %. Die intratägliche Präzision lag unter 5,0 %, die intertägliche unter 6,0 %. Die Probenlösungen sind bei Raumtemperatur 3 Stunden und bei 4 °C 72 Stunden stabil. Die Methode ist empfindlich, genau und reproduzierbar. Die Methode wurde angewendet, um den Gehalt von 13 monohydroxylierten Lipidmediatoren in Geweben von normalen und rheumatischen Ratten zu bestimmen. Die Ergebnisse zeigen deutliche Unterschiede in der Verteilung der monohydroxylierten Lipidmediatoren in verschiedenen Organen normaler Ratten. Bei rheumatischen Ratten zeigen die meisten HETE und HDHA in Herz-, Leber-, Lungen- und Nierengeweben einen Anstieg, was darauf hinweist, dass rheumatoide Arthritis entzündliche Stoffwechselveränderungen in den Organen der Ratten verursachen kann.

关键词

Ultra-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie - Tandem-Massenspektrometrie; monohydroxylierte Lipidmediatoren; rheumatoide Arthritis; Hydroxy-Eikosatetraensäure; Hydroxy-Docosahexaensäure

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