Bei der herkömmlichen isothermen Indexamplifikation ist die Energie an den Enden der Zielnukleinsäure und der symmetrischen Amplifikationsvorlage gleich. Wenn sich die Zielnukleinsäure jedoch mit dem 5’-Ende der Vorlage hybridisiert, ist die Amplifikation schwer auszulösen, was die Analyse von Spurenmengen der Zielnukleinsäure einschränkt. In dieser Arbeit wurde eine Strategie der isothermen Indexamplifikation mit asymmetrisch induzierter Hybridisierung (AEXPRA) für eine hochsensitive und schnelle Analyse von microRNA entwickelt. Mit miR-196b als Ziel und einer entsprechend entworfenen asymmetrischen Amplifikationsvorlage kann miR-196b aufgrund vollständiger Komplementarität zum 3’-Ende der Vorlage, aber nur teilweiser Komplementarität zum 5’-Ende vollständig an das 3’-Ende hybridisieren. Die Methode weist hohe Sensitivität, Spezifität und Geschwindigkeit auf. Die gesamte Reaktionszeit liegt unter 30 Minuten, und miR-196b kann bis zu 0,42 amol/L nachgewiesen werden. Zur Überprüfung der Anwendbarkeit wurde die Methode zur Analyse von miR-196b in Serumextrakten verwendet, wobei die Methode erfolgreich die miR-196b-Expression bei nicht-kleinzelligem Lungenkrebs und bei gesunden Probanden unterscheiden konnte. Die Ergebnisse stimmten mit RT-qPCR überein. Die Methode zeichnet sich durch hohe Genauigkeit und Zuverlässigkeit aus und verspricht eine wichtige Rolle in der klinischen Diagnostik und der pathologischen Forschung von miRNA.

isotherme Indexamplifikation;microRNA;fluoreszenznachweis;Krankheitsdiagnose